抑菌環(huán)是什么？抑菌環(huán)試驗方法步驟

4次 2025.06.24

　　抑菌環(huán)是在抗菌藥物敏感性試驗中出現(xiàn)的一種直觀現(xiàn)象。當將含有抗菌藥物的紙片放置在已接種測試菌的瓊脂培養(yǎng)基表面時，抗菌藥物會從紙片向周圍瓊脂中擴散，形成以紙片為中心、濃度由高到低向外遞減的梯度。抑菌環(huán)試驗相關方法步驟有哪些？


　　在抗菌藥物濃度高于最小抑菌濃度（MIC）的區(qū)域，細菌生長受到抑制，從而在紙片周圍形成一個透明的、沒有細菌生長的環(huán)形區(qū)域，這個區(qū)域就被稱為抑菌環(huán)。抑菌環(huán)的大小反映了抗菌藥物對測試菌的抗菌活性強弱，抑菌環(huán)直徑越大，通常表明該抗菌藥物對測試菌的抑制作用越強；反之，則抑制作用越弱。


抑菌環(huán)試驗


　　抑菌環(huán)試驗方法步驟


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　　實驗材料：準備好瓊脂培養(yǎng)基（如M-H瓊脂培養(yǎng)基，常用于細菌的藥敏試驗）、無菌平皿、無菌棉簽、抗菌藥物紙片（需從正規(guī)渠道購買，確保質(zhì)量和效期）、標準菌株或臨床分離菌株、恒溫培養(yǎng)箱等。


　　培養(yǎng)基制備：按照培養(yǎng)基說明書準確配制瓊脂培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值至規(guī)定范圍（一般M-H瓊脂培養(yǎng)基pH為7.2-7.4）。將配制好的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌（通常121℃，15-20分鐘），滅菌后待培養(yǎng)基冷卻至50℃-55℃左右，在無菌條件下倒入無菌平皿中，使培養(yǎng)基厚度均勻，約4mm（可通過控制倒平板的培養(yǎng)基體積實現(xiàn)，一般90mm平皿倒入15-20mL培養(yǎng)基），待培養(yǎng)基凝固備用。


　　菌液制備：從新鮮培養(yǎng)的斜面上挑取純培養(yǎng)的測試菌株，接種到合適的液體培養(yǎng)基中（如營養(yǎng)肉湯），在適宜溫度下（一般35℃-37℃）振蕩培養(yǎng)4-6小時，使細菌處于對數(shù)生長期。使用濁度計或比濁法，將菌液濃度調(diào)整至0.5麥氏濁度標準（相當于1.5×10?CFU/mL左右），若沒有濁度計，也可與0.5麥氏濁度標準管目視比濁進行調(diào)整。


　?。ǘ┙臃N與貼片


　　接種：用無菌棉簽蘸取調(diào)整好濃度的菌液，在試管內(nèi)壁旋轉擠壓，去除多余菌液，然后在瓊脂培養(yǎng)基表面均勻涂抹接種，重復涂抹3次，每次旋轉平皿約60°，最后沿平皿邊緣涂抹一周，確保整個瓊脂表面均勻接種細菌。


　　貼片：待接種后的培養(yǎng)基表面水分稍干（約5-10分鐘），用無菌鑷子或紙片分配器將抗菌藥物紙片貼于培養(yǎng)基表面。紙片一旦貼上，不得移動，各紙片中心間距應不小于24mm，紙片距平皿邊緣應不小于15mm。每個平皿一般貼4-6張紙片為宜，避免紙片間抗菌藥物擴散相互影響。


　?。ㄈ┡囵B(yǎng)與結果觀察


　　培養(yǎng)：將貼好紙片的平皿倒置（防止冷凝水滴落影響實驗結果），放入恒溫培養(yǎng)箱中，根據(jù)測試菌株的特性設置適宜的培養(yǎng)溫度和時間。一般細菌在35℃-37℃培養(yǎng)16-18小時，苛養(yǎng)菌（如肺炎鏈球菌等）需在含5%-10%CO?的環(huán)境中培養(yǎng)18-24小時。


　　結果觀察：培養(yǎng)結束后，取出平皿，在黑色背景、散射光下測量抑菌環(huán)直徑（精確到毫米）。測量時，應測量包括紙片直徑在內(nèi)的抑菌環(huán)直徑，從平板背面直接測量最接近的毫米數(shù)。記錄每種抗菌藥物紙片的抑菌環(huán)直徑，并根據(jù)CLSI（美國臨床和實驗室標準協(xié)會）或EUCAST（歐洲抗菌藥物敏感性試驗委員會）制定的標準，判斷測試菌對該抗菌藥物的敏感性（敏感、中介或耐藥）。